جداسازی و کلونینگ ژن ایزوفلاون سنتتاز از گیاه سویا رقم ویلیامز iii

ایزوفلاونوییدها، دسته­ای از ترکیبات فلاونوییدی هستند که با استفاده از آنزیم ایزوفلاون سنتاز از پیش­ماده فلاوانونی در گیاهان لگوم تولید می­شوند. مهم­ترین ایزوفلاون­های موجود در گیاه سویا شامل: جنیستین و دیدزین می­باشند که خواص دارویی زیادی دارند. تحقیقات نشان می­دهد که مصرف مرتب این ترکیبات خطر ابتلا به سرطان­های وابسته به هورمون­های جنسی را کاهش داده و کاهش علایم یائسگی، پوکی استخوان، تعدیل کلسترول خون، بهبود بیمای­های کرونری قلبی و غیره همگی از مزایای استفاده از این ترکیبات می­باشد. در این پژوهش به­منظور جداسازی ژن 2- هیدروکسی ایزوفلاوانون سنتاز (ifs) ابتدا rna کل از سویا جداسازی شده و کتاب­خانه cdna ساخته شد. ژن  ifsبا پرایمرهای اختصاصی با مکان­های برشی hindiii و xbai از طریق pcr تکثیر گردید و سپس ژن تکثیر شده با اندازه 1566 جفت بازی پس از خالص­سازی از روی ژل در مکان xbai/hindiii در ناقل بیانی pet28a+ کلون­ شد. سپس پلاسمید نو­ترکیب به استرینxli-blue  باکتری e. coli منتقل گردید. وجود ژن ifs در پلاسمید­های نوترکیب با دو روش pcr و هضم آنزیمی مورد تائید قرار گرفت. در نهایت، حامل مذکور را می­توان برای بیان در داخل پروکاریوت یا با سابکلون کردن مجدد برای انتقال ژن به گیاهان مختلف با روش اگروباکتریوم و تفنگ ژنی مورد استفاده قرار داد.